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在含有单向生物素标记的通用引物作用下完成亲子鉴定复合扩增

文章来源:司法亲子鉴定服务中心 文章分类:新闻资讯 发布时间:2019-07-19

     SNPlex亲子鉴定方法SNPlex系统用于连接片段模板,纯化连接产物并用普通引物进行扩增。生物素与链霉亲和素的共价结合固定在杂交板上后,探针与锚定产物交叉,然后用洗脱探针进行电泳分型检测(Tobler等人)。,De Lavega等人。,2005年)。寡脱氧核苷酸连接反应包括模板活化和连接两部分。活化是指在特定条件下,利用分子的热碰撞原理,将模板DNA均匀分散到可利用的DNA片段中,我们称之为碎裂过程。在ATP存在下,模板DNA被分散成片段,结合到鳄鱼和探针上,称为寡脱氧核苷酸键合反应。每个SNP位点使用两个通用连接子和三个与位点相关的探针(两个等位基因特异性寡脱氧核苷酸探针和一个位点特异性寡脱氧核苷酸探针)进行应答。对于SNP位点来说,它只是单链上的一个碱基位置。在亲子鉴定系统中,位点前的序列设计为ASO的一部分,位点后的序列被设计为位点特异性寡核苷酸探针的一部分。基因特异性寡核苷酸探针ASO的另一部分是具有标记性质的ZipCode序列,ZipCode序列可以与ZipChutte探针(严格互补)结合。位点特异性寡核苷酸探针的另一部分是由带有引物的反向互补序列组成。在这两种短吻鳄中,等位基因特异性寡脱氧核苷酸探针鳄鱼由一个与普通引物的正互补序列和一个具有特定限制性位点的发夹结构组成。ASO探针中带有通用引物的正互补序列和与ZipCode序列的互补部分以及具有特定限制位点的发夹结构由两条短吻鳄组成。该位点特异性寡脱氧核苷酸探针鳄鱼只有一个发夹结构,具有特定的限制性位点和一个片段互补的反向互补序列的一般引物。在特定条件下,探针/探针将与模板互补,并在ATP存在下与其它部分连接,形成半闭环结构。在特异性酶作用下,将单链DNA水解,将具有保护连接的连接产物纯化成PCR反应模板,在含有单向生物素标记的通用引物作用下完成复合扩增。将扩增产物加入链霉亲和素固定的杂化板进行第一次杂交反应后,洗脱不含杂合结合的产物,再加入与ZipCode序列完全互补的ZipChutte探针进行第二个杂交。纯化并收集ZipChut探针进行电泳检测。

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